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ELISA检测试ji盒应yong定性夹心免疫检测ji术
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出处:www.weikeqi-biotech.com   分类:公司新闻  发布:2020-2-20 13:51:47   阅读:(1390)

  ELISA检测试ji盒应yong定性夹心免疫检测ji术,yong合成的HEV(Hepatitis E virus戊xing肝yanbing毒)多肽kangyuan包被wei縵huang錬antiao,这些多肽是中国xingHEV毒zhuhe心氨ji酸序lie中kangyuan性很qiang的肽段,分别来自于该毒zhu的kai放阅秎iang?和kai放阅秎iang?。jiang样pinhuo电玩999加入孔中并孵育,如guoqi中存在HEV IgMkang体,这些kang体就会与HEV 的多肽kangyuan结合,并固定在上面,xiban除去qi它非特异性kang体和样pin中的qi它成份。然后加入羊kangrenIgM-HRP(lagen过氧化wu酶)胒u岷蟱u,jing第二次孵育后,胒u岷蟱u就会与次孵育结合上的HEV IgMkang体相结合,xiban除去未结合的胒u岷蟱u,加入TMB底wu溶液,在第三次孵育shi会发生酶-底wu反应,zhi有na些han有HEV IgMkang体和胒u岷蟱u所形成的fu合wu的孔cai会发生颜色变化,加入硫酸溶液终止酶和底wu间的反应,并在波长: 450nm处测liangO.D.zhi,按照本HEV IgMkang体elisa试ji盒的测试标准, O.D.zhi大于huo等于Cut-Offzhi的样pin被认为是chu试阳性。

  ELISA的ji础蕅iang箉uanhuokang体的固相化及kangyuanhuokang体的酶标记。结合在固相载体表面的kangyuanhuokang体仍保持qi免疫学huo性,酶标记的kangyuanhuokang体既保liuqi免疫学huo性,又保liu酶的huo性。在测定shi,shou检标本(测定qi中的kang体huokangyuan)与固相载体表面的kangyuanhuokang体qi反应。yongxi涤的方fa使固相载体上形成的kangyuankang体fu合wu与液体中的qitawu謘hi謐ai。再加入酶标记的kangyuanhuokang体,也通过反应er结合在固相载体上。此shi固相上的酶liang与标本中shou检wu质的liang硈hi欢ǖ谋壤<尤朊阜从Φ牡譿u后,底wu被胒u呋晌猩鷚u,产wu的liang与标本中shou检wu质的liang直接相关,故kegen据呈色的深qianjin行定性huo定liang分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大liao免疫反应的结guo,使测定方fa达到很高的敏感度。

  ELISAkeyong于测定kangyuan,也keyong于测定kang体。在这zhong测定方fa中有三ge必要的试ji:(1)固相的kangyuanhuokang体,ji"免疫xifuji"(immunosorbent);(2)酶标记的kangyuanhuokang体,称为“酶联wu”、“结合wu”(conjugate);(3)酶反应的底wu。gen据试ji的来源和标本祅a榭鲆约凹觳獾木咛錿iao件,keshe计出各zhong不tong类xing的检测方fa。yong于临床检验的ELISA主要有以下几zhong类xing:

  在临床检验中,此fa适yong于检验各zhongdan白质等大分子kangyuan,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。zhi要获得针对shou检kangyuan的异性kang体,就keyong于包被固相载体和制备胒u岷蟱uerjian立此fa。如kang体的来源为kang血清,包被和酶标yong的kang体分别取自不tongzhong属的动wu。如应yong单克隆kang体,一banxuan择两ge针对kangyuan上不tong决定cu的单kang,分别yong于包被固相载体和制备胒u岷蟱u。这zhong双位点夹心fa具有很高的特异性,erqieke以jiangshou检标本和酶标kang体一qi保温反应,作一步fa检测。

  双kang体夹心fa是检测kangyuanchangyong的方fa底wu显色。固相上的胒u呋譿u成为有色产wu。通过比色,测知标本中kangyuan的liang。  在临床检验中,此fa适yong于检验各zhongdan白质等大分子kangyuan,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。zhi要获得针对shou检kangyuan的异性kang体,就keyong于包被固相载体和制备胒u岷蟱uerjian立此fa。如kang体的来源为kang血清,包被和酶标yong的kang体分别取自不tongzhong属的动wu。如应yong单克隆kang体,一banxuan择两ge针对kangyuan上不tong决定cu的单kang,分别yong于包被固相载体和制备胒u岷蟱u。这zhong双位点夹心fa具有很高的特异性,erqieke以jiangshou检标本和酶标kang体一qi保温反应,作一步检测。

  在一步fa测定中,当标本中shou检kangyuan的hanliang很高shi,过liangkangyuan分别和固相kang体及酶标kang体结合,er不再形成"夹心fu合wu"。类tong于沉淀反应中kangyuan过剩的后带现象,此shi反应后显色的xi光zhi(位于kangyuan过剩带上)与标准曲xian(位于kang体过剩带上)某一kangyuan浓度的xi光zhi相tong(参见1.3.2,图1-4),如按changfa测读,所得结guojiang低于实际的hanliang,这zhong现象被称为钩状效应(hook effect),因为标准曲xian到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重shi,反应shen至ke不显色er出现假阴性结guo。因此在使yong一步fa试ji测定标本中hanliangke异chang增高的wu质(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)shi,应注意ke测fanwei的zhi。yong高亲和力的单克隆kang体制眆u死嗍詊ike削弱钩状效应。

  假使在被测分子的不tong位点上han有多ge相tong的决定cu,例如HBsAg的a决定cu,也keyong针对此决定的tong一单kang分别包被固相和制备胒u岷蟱u。但在HBsAg的检测中应注意亚xingwen题,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4ge亚xing,虽然每zhong亚xing均有相tong的a决定cu的反应性,这也是yong单kang作夹心fa应注意的wen题。

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